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“益肾调督”针灸法对AD模型大鼠海马神经元线粒体损伤

来源:华体会   发布时间:2021-05-22 15:39nbsp;  点击量:

本文摘要:目的:以线粒体受损为中心,从线粒体超微结构、线粒体受损三大途径(线粒体能量代谢障碍途径、线粒体动力学出现异常途径和线粒体通透性切换孔对外开放途径)方面抵达,综合系统的探究线粒体受损机制与阿尔茨海默病发作机制之间有可能不存在的相关性及“益肾调督”针灸法预防AD过程中在线粒体受损方面的有可能起到机制。

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目的:以线粒体受损为中心,从线粒体超微结构、线粒体受损三大途径(线粒体能量代谢障碍途径、线粒体动力学出现异常途径和线粒体通透性切换孔对外开放途径)方面抵达,综合系统的探究线粒体受损机制与阿尔茨海默病发作机制之间有可能不存在的相关性及“益肾调督”针灸法预防AD过程中在线粒体受损方面的有可能起到机制。方法:Wistar大鼠,SPF级、雄性、体重200±20g,80只,实验前所有大鼠置放鼠笼常规适应性喂食一周;实验时,经Morris水迷宫测试检验,去除先天性不合乎审定标准的大鼠(定位航行试验中平均值躲避潜伏期较短,空间探寻实验中的横跨原平台次数和有效地区停留时间较长者审定为不合格者,应给以去除,补足适当合格者),使用双侧海马区(前囟后3.3mm,中线左右各旁开1.5mm,深度3mm)分别静脉注射Aβ1-42(各5μL)的模型拷贝方法,以及展开Morris水迷宫的模型审定方法(定位航行试验和空间探寻实验的模型评价方法),通过《公共卫生统计学》随机数字表法将80只大鼠随机分成长时间组、假手术组、模型组和针灸化疗组,每组20只,分笼圈养,后用苦味酸给与染色标记编号;长时间组、假手术组(除静脉注射等量的生理盐水外,其余同模型组处置方法)和模型组均展开适当处置后,长时间圈养,不展开任何处置;针灸化疗组在模型拷贝顺利后,再行针刺百会穴(向前平刺3~5mm),双侧肾俞穴(稍向内斜螫5mm)后,搭配特制艾条(Φ=0.6cm)于“百不会”和“肾俞”穴位上方2~3cm一处展开悬灸,使穴位表皮温度在43±1℃,持续15min,每日1次,7天为一个疗程,总计2个疗程,疗程间睡觉1日;运用透射电镜、免疫组化、免疫荧光、免疫系统印迹、RT-PCR等技术,通过观察各组大鼠海马神经元线粒体超微结构、线粒体能量代谢涉及蛋白Aβ-融合性酒精脱氢酶蛋白ABAD与细胞色素氧化酶Ⅳ(COXⅣ)、线粒体动力学涉及蛋白线粒体分化蛋白1(Fis1)与内膜视神经衰退1蛋白(Opa1)、线粒体通透性切换孔涉及蛋白亲环蛋白D(CypD)等指标的变化,探究“益肾调督”针灸法对线粒体受损三大途径的影响。整个实验过程严格遵守国家科技部公布的《关于爱护实验动物的指导性意见》涉及规定。

结果:(1)“实验一”结果显示,模型组大鼠毛发光泽度减少,部分可见脱毛相伴行动迟缓,喂食饮水量有所增加,对外界性刺激反应减少;运用透射电镜仔细观察其海马CA1区神经元线粒体可见,线粒体形态呈圆形卵圆形,但其数目较较少,且产于失衡,内嵴大部分排序失调,部分可见内嵴沉淀消失,基质质地,线粒体出血显著且部分空泡变性;周边内质网扩展,与长时间组和假手术组具备显著的差异;而针灸化疗组大鼠皮毛另有光泽,喂食饮水量长时间,对外界性刺激反应较难;运用透射电镜可见线粒体形态呈圆形卵圆形,数目较难,且产于均匀分布,内嵴尚能明晰且排序较难,少数可见嵴内腔严重扩展及内嵴轻度沉淀,基质尚能均匀分布,未见线粒体出血及空泡变性;周边内质网轻度扩展,总体较模型组有所改善。(2)“实验二”结果显示,模型组大鼠海马神经元线粒体中ABAD的含量显著低于长时间组和假手术组(P。


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